Catégories de Sels tampons communs

En chromatographie en phase inversée, le pH de la phase mobile est généralement compris entre 2 et 7. Lorsque l'analyte peut se dissocier dans des conditions de phase inversée, ou lorsque le pH de l'échantillon est en dehors de la plage de 2 à 7, aSel tamponEst requis. Les composés qui peuvent se dissocier dans des conditions de phase inversée ont généralement des groupes amino et carboxyle, avec des valeurs pKa comprises entre 1 et 11. Le choix du pH tampon correct peut garantir que les groupes fonctionnels dissociés existent sous forme ionique ou sous forme de composé neutre. Si le pH de l'échantillon est nocif pour la colonne, une solution tampon peut le rendre plus doux ou réduire les dommages. La plage de tolérance au pH pour une colonne classique à base de silice est de 2 à 8. Les sels d'électrolyte tamponnés communs sont classés comme suit.

1. alcalineSels tampons

Les additifs courants comprennent l'ammoniac et la triéthylamine, qui peuvent tous deux augmenter le pH de l'eau à un niveau très élevé, suffisamment élevé pour dissoudre les particules de gel de silice. Par conséquent, ils doivent être utilisés avec prudence. De plus, ces deux solvants ne sont généralement pas facilement éliminés par des méthodes de lavage et d'entretien. Surtout pour la triéthylamine, même si elle est de pureté chromatographique, elle peut être contaminée en raison d'une détérioration après une longue période de stockage.

2. AcideSels tampons

1. acide formique: habituellement utilisé à une concentration inférieure à 1%, il peut augmenter le pH de l'eau à environ 2.

2. acide acétique: légèrement moins acide que l'acide formique, habituellement utilisé à une concentration ne dépassant pas 5%, il peut augmenter le pH de l'eau à environ 2.

3. Acide trifluoroacétique: un acide relativement fort, généralement utilisé à une concentration ne dépassant pas 0.5%, il peut diminuer le pH de l'eau en dessous de 2. Il a une grande intensité ionique et un certain effet de paire d'ions, et est souvent utilisé comme additif lors de l'analyse des protéines et des peptides. Les problèmes les plus mortels de ces trois acides résident dans leur absorption des UV à de faibles longueurs d'onde. Il n'est généralement pas recommandé de les utiliser à des longueurs d'onde inférieures à 215nm. De plus, l'acide formique, l'acide acétique et l'acide trifluoroacétique sont volatils et la concentration de ceux-ciSels d'électrolyte tamponnésPeut changer au fil du temps.

4. acide phosphorique: c'est un acide non volatil avec une bonne intensité ionique. La chose la plus importante est qu'il n'y a pas d'absorption de fond dans la zone UV de faible longueur d'onde. Cependant, il présente également certains inconvénients, comme être incompatible avec les méthodes de spectrométrie de masse. En outre, il existe d'autres acides, tels que l'acide sulfurique, l'acide chlorhydrique ou l'acide citrique, mais ils sont rares.

3. SelSels tampons

Par rapport aux tampons acide-base simples, en ajustant les proportions des deux sels dans différentsSels tampons, Une solution tampon avec un certain pH peut être facilement préparée, et des sels tampons avec une capacité de mise en mémoire tampon peuvent contrôler la valeur du pH de la phase mobile.

1. Sels formatés: les sels de formiate couramment utilisés en chromatographie liquide sont le formiate d'ammonium. Ce type de sel a une bonne solubilité, est complètement compatible avec les méthodes de spectrométrie de masse liquide et a un impact relativement faible sur les colonnes chromatographiques. Cependant, l'inconvénient est que l'intensité des ions est relativement faible. De plus, les sels de formiate sont sujets à la déliquescence, ce qui la rend difficile à peser et potentiellement volatile en phase mobile. Lorsqu'il est combiné avec de l'acide formique, le système tampon acide formique-formiate d'ammonium peut atteindre une capacité de mise en mémoire tampon dans une plage de pH de 3 à 4.5, simplement en ajustant le rapport des deux.

2. sels d'acétate: des exemples courants sont l'acétate d'ammonium. L'utilisation de sels d'acétate est similaire aux sels de formiate et l'intensité ionique n'est pas élevée. Le système tampon acide acétique-acétate d'ammonium peut contrôler le pH dans une plage de 4 à 5.5.

3. Sels de phosphate: l'une des solutions tampons les plus couramment utilisées en HPLC dans des conditions de détection UV car il peut être utilisé à des longueurs d'onde inférieures à 220 nm. Les sels de phosphate ont trois valeurs pKa. Bien qu'ils soient largement utilisés, il faut prêter attention à leurs problèmes de solubilité pour les empêcher de précipiter dans les pompes HPLC ou les colonnes chromatographiques dans des conditions de concentration élevée.

Les sels de sodium et de potassium de l'acide phosphorique sont couramment utilisés, et la capacité de contrôle du pH des deux est très similaire, avec seulement une légère différence d'intensité ionique. Dans la plupart des cas, ils peuvent être utilisés de manière interchangeable. Parce que l'acide phosphorique est un acide polybasique, il peut former un monohydrogénophosphate et un dihydrogénophosphate, de sorte que l'utilisation du système tampon phosphate pour ajuster le pH est plus flexible et peut couvrir une large gamme, et peut fournir une intensité ionique élevée. Malheureusement, le système tampon phosphate pour phase mobile n'est pas compatibleLe avec spectrométrie de masse.